Mutation Detection / TILLiNG

TILLiNG (Targeting Induced Local Lesions in Genomes) is a reverse genetics technique designed to detect unknown mutations in a gene, by forming DNA heteroduplex as a result of mixing wild-type and chemically-induced mutated genes.

In order to increase throughput, the genes are first pooled then PCR amplified. This is followed by heteroduplex formation, then the samples are enzymatically digested. Next, digested cleaved DNA fragments are analyzed for scoring. The enzyme specifically recognizes the mismatched base pairs and cleaves the DNA at the site of mismatch.

Until now, detecting unknown mutations was both a challenging and a time intensive process. Advanced Analytical has developed a streamlined TILLiNG process that requires NO fluorescently labeled primers and NO sample clean-up. Detecting unknown mutations has never been easier, especially with this process developed for the AdvanCE™ FS Nucleic Acids Analyzer platform (see below). In comparison to the traditional method, the AdvanCE method requires less than ½ the hands on time and analyses can be completed twice as fast (total time).

Currently, AdvanCE customers are using their instruments to do:

• reverse genetics TILLiNG of rice.
• reverse genetics TILLiNG of corn.
• reverse genetics TILLiNG of wheat.
• reverse genetics TILLiNG of lettuce.
• reverse genetics TILLiNG of tomato.
• reverse genetics TILLiNG of soybean.

Regardless of whether your lab wants to do TILLiNG (mutation detection) with diploids, tetraploids or hexaploids, the AdvanCE™ FS Nucleic Acids Analyzer has excellent sensitivity for analyzing medium and large-sized TILLiNG pools.

Mutations Detektion / TILLING

TILLING (Targeting Induced Local Lesions in Genomes) ist eine Methode, die entwickelt wurde um unbekannte Veränderungen in einem Gen zu Detektieren. Hierfür wird ein Heteroduplex aus einer Wildform und einem chemisch veränderten mutagenen Gen geformt. Um den Durchsatz zu erhöhen, werden mehrere dieser Gene vereinigt und durch die PCR vervielfacht, gefolgt von der Heteroduplexformung und anschließendem enzymatischen Verdau. Die durch die Verdauung zerspalteten DNA-Fragmente werden nun analysiert. Das Enzym erkennt die mutagenen Stellen der DNA und spaltet diese an exakt dieser Stelle. Solche unbekannten Veränderungen zu ermitteln kann eine zeit- und arbeitsintensive Herausforderung darstellen. Für die AdvanCE™ FS Plattform wurde eine ausgeklügelte Methode entwickelt, die keine fluoreszenz-gelabelten Primer und keine weiteren Aufreinigungsschritte benötigt. Im Vergleich zur traditionellen Methode kann die AdvanCE™ FS - Methode in weniger als der Hälfte an Arbeitszeit das Doppelte an Messergebnissen produzieren.

Détection de mutations / labourage

Le travail du sol (ciblage induit des lésions locales dans les génomes) est une technique de génétique inverse conçue pour détecter les mutations inconnues dans un gène, en formant des ADN hétéroduplex à la suite du mélange sauvage et induite chimiquement des gènes mutés. Afin d'accroître le débit, les gènes sont mis en commun, PCR amplifié suivi par la formation de hétéroduplex et par la suite enzymatique digérée. Les fragments d'ADN clivés digérés sont analysés pour la notation. Plus précisément, l'enzyme reconnaît les paires de bases non appariées et s'attache à l'ADN sur le site de l'inadéquation.

Les détections de mutations inconnues peuvent être un processus intensif difficile et prenant du temps. Un processus simplifié de TILLING qui ne nécessite pas d'amorces marquées par fluorescence, et aucun échantillon n'a été préparé pour détecter les mutations inconnues n'a été développé pour la plateforme AdvanCE™ FS. Comparé à la méthode traditionnelle, la méthode AdvanCE™ FS peut être complétée avec moins de pénibilité et les résultats rapportés deux fois plus rapide (temps total).

Detección de mutación / TILLiNG

TILLiNG (lesiones locales inducidas en blancos de Genomas) es una técnica genética reversa diseñada para detectar mutaciones desconocidas en un gen, por formación de un heteroduplex de DNA como resultado de la mezcla de una variedad silvestre y genes mutados inducidos químicamente. Con el fin de incrementar el rendimiento, los genes son unidos, amplificados por PCR seguido de una formación de heteroduplex y una la digestión enzimática subsecuente. La digestión de los fragmentos de DNA divididos es analizada por puntuación. La enzima específicamente reconoce el par de bases que no coincide y divide el DNA en el sitio no complementario.

La detección de mutaciones desconocidas pueden ser un reto y una inversión de tiempo intensivo. Un proceso TILLING racional que no requiere de primers marcados con fluorescencia, sin ningún paso de limpieza de la muestra para detectar mutaciones desconocidas ha sido desarrollado por la plataforma AdvanCETM FS. En comparación con el método tradicional, el método AdvanCETM FS puede ser concretado en menos de la mitad del tiempo y los resultados pueden ser reportados dos veces más rápido (tiempo total).

Detecção de Mutação / Tilling

Tilling (Targeting Induced Local Lesions in Genomes) é uma técnica de genética reversa, desenvolvida para detectar mutações em um gene desconhecido, mistura-se o tipo selvagem com o gene mutado quimicamente e tem se como resultado a formação de heteroduplex de DNA. A fim de aumentar o rendimento, os genes são agrupados, amplificados, seguido pela formação heteroduplex e, posteriormente, clivados por enzimas. Os fragmentos de DNA clivados são analisados através de marcações. A enzima reconhece especificamente os pares de bases incompatíveis e clivam o DNA no exato local da mutação.

Detecção de mutações desconhecidas pode ser um processo desafiador e intenso. Para detectar mutações a plataforma FS AdvanCE™ FS desenvolveu o ensaio TILLING que não exige primers fluorescente e passos de lavagem. Em comparação ao método tradicional, o método AdvanCE™ FS pode ser concluído com pequena intervenção humana sobre as amostras e os resultados são obtidos duas vezes mais rápido.

基因突变检测 / TILLiNG

目标诱导的局部基因突变(TILLING)是一种通用地发现和检测未知的基因突变技术手段.
它是通过混合正常基因和人工化学诱导突变的基因一起,从而形成一个杂和DNA双链.
为了提高分析速度和产量, 通常几个不同的基因混合到一起.,
PCR放大扩增的产物进一步形成杂和DNA双链,接着利用生物酶切割.
生物酶能够识别突变的碱基,从而切割一个DNA片段 成两个小的片段.通过测定DNA 片段的大小报告是否发生了基因突变. AdvanCE™ FS平台不需要标记引物和样品脱盐, 既降低了样品分析成本又大大地提高了分析速度.